人关节软骨细胞HC-a

2.1 FSTL1 在人关节软骨细胞内的表达 免疫荧光结果显示（图 1），FSTL1 在人关节软骨细胞内广泛表达，且主要表达在细胞质。 A.卵泡抑素样蛋白 1（FSTL1 ， 红 色 ）B. 4 '，6 - 二 脒 基 -2 - 苯 基 吲 哚 （DAPI，蓝色）C.合成图（Merge，粉色）。

2.2 IL-1β 刺激后在人关节软骨细胞中 FSTL1 蛋白表达量 Western Blot 结果显示（图 2），通过 t 检验统计分析发现相较于正常人正常关节软骨细胞，IL-1β 诱导的人关节软骨细胞FSTL1 蛋白表达水平明显减少， 定量分析结果具有显著性差异。 （P＜0.01）。

验收细胞注意事项 

1、收到人关节软骨细胞HC-a  ，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。 

2、收到人关节软骨细胞HC-a   ，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止 3-5 小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。 

3、收到人关节软骨细胞HC-a 后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时 血清浓度可以加到 15％去培养。若细胞迏到 80%左右 ，血清浓度还是在 10％。 

4、收到人关节软骨细胞HC-a 时如无异常情况 ，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下 5-10ML 培养基继续培养：超过 80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000 转/分钟离心 3 分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。 

5、将培养瓶置于 37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以备不时之需。 

6、24 小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加 3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS 或 Hanks’液洗涤后弃去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般 1-3 分钟，不超过 5 分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入 3-5ml 培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。 

7、贴壁细胞 ，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2 培养。

特别提醒： 原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。