昆虫卵巢细胞SF9
BLUEFBIO™ Product Sheet
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细胞名称 |
昆虫卵巢细胞SF9 |
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货物编码 |
BFN607200875 |
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产品规格 |
T25培养瓶x1 |
1.5ml冻存管x2 |
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细胞数量 |
1x10^6 |
1x10^6 |
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保存温度 |
27℃ |
-198℃ |
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运输方式 |
常温保温运输 |
干冰运输 |
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安全等级 |
1 |
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用途限制 |
仅供科研用途 2类 |
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培养体系 |
DMEM高糖培养基+10%FBS+1%三抗 |
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培养温度 |
37℃ |
二氧化碳浓度 |
5% |
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简介 |
昆虫卵巢细胞SF9细胞系源于雌性草地贪夜蛾蛹的卵巢组织，可以用于复制杆状病毒表达载体。该细胞引种于ATCC CRL-1711 |
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注释 |
Group: Insect cell line. Group: Recombinant protein production insect cell line. Group: Space-flown cell line (cellonaut). Doubling time: 27 hours (PubMed=21667340); ~50 hours (DSMZ). Karyotypic information: Heterogeneous, contains a mixture of diploid and tetraploid cells. Omics: ESTs sequenced. Omics: Transcriptome analysis. Omics: Genome sequenced. Anecdotal: Have been flown in space on shuttle flights STS-50 (USML-1), STS-54 and STS-57 (Spacehab-1) to study growth in microgravity (PubMed=8050503). |
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STR信息 |
暂无信息 |
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参考文献 |
PubMed=24375231; DOI=10.1007/s10529-013-1429-6 Wilde M., Klausberger M., Palmberger D., Ernst W., Grabherr R. Tnao38, high five and Sf9 -- evaluation of host-virus interactions in three different insect cell lines: baculovirus production and recombinant protein expression. Biotechnol. Lett. 36:743-749(2014)
PubMed=24672045; DOI=10.1128/JVI.00780-14 Ma H., Galvin T.A., Glasner D.R., Shaheduzzaman S., Khan A.S. Identification of a novel rhabdovirus in Spodoptera frugiperda cell lines. J. Virol. 88:6576-6585(2014)
PubMed=28423032; DOI=10.1371/journal.pone.0175633 Hashimoto Y., Macri D., Srivastava I., McPherson C., Felberbaum R., Post P., Cox M. Complete study demonstrating the absence of rhabdovirus in a distinct Sf9 cell line. PLoS ONE 12:E0175633-E0175633(2017)
PubMed=28839023; DOI=10.1128/genomeA.00829-17 Nandakumar S., Ma H., Khan A.S. Whole-genome sequence of the Spodoptera frugiperda Sf9 insect cell line. Genome Announc. 5:e00829.17-e00829.17(2017)
PubMed=29038528; DOI=10.1038/s41598-017-12713-9 Shu B.-S., Zhang J.-J., Sethuraman V., Cui G.-F., Yi X., Zhong G.-H. Transcriptome analysis of Spodoptera frugiperda Sf9 cells reveals putative apoptosis-related genes and a preliminary apoptosis mechanism induced by azadirachtin. Sci. Rep. 7:13231-13231(2017)
PubMed=29133148; DOI=10.1016/j.pep.2017.11.002 Geisler C., Jarvis D.L. Adventitious viruses in insect cell lines used for recombinant protein expression. Protein Expr. Purif. 144:25-32(2017) |
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产品文献引用及生物学性状研究：
3.4.1 Western blot 及荧光定位分析 Ac106/107-EGFP 的表达量及在宿主细胞中的分布 2 µg 病毒杆粒 Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP、Bacmid-Ac106/107-EGFP和 Bacmid-EGFP 分别转染细胞 6、12、24、48 h 后收集细胞爬片和细胞培养板中的SF9细胞。收集细胞后提取总蛋白，收集的细胞爬片用 DAPI 染料染细胞核后制片并观察 。 如图 3.1 A所 示 ， Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP 、Bacmid-Ac106/107-EGFP 的 Ac106/107-EGFP 在 6 h p.t. 开始表达，且在 6-48 h p.t.表达水平逐渐增高。 如 图 3.1 B 所示，在 6 、 12 h p.t. 时 ，Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP 、 Bacmid-Ac106/107-EGFP 杆粒表达的Ac106/107-EGFP 主要位于细胞质中，少量进入细胞核；在 24、48 h p.t.时Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP和Bacmid-Ac106/107-EGFP的Ac106/107-EGFP 在细胞质和核均有分布，且在病毒侵染后期，部分细胞核皱缩，出现凋亡的细胞核表象。
3.4.2 Ac106/107 不影响病毒 DNA 复制
用 2 µg 病毒杆粒 Bacmid-EGFP、Bacmidac106/107KO -EGFP、Bacmidac106/107KO -Ac106 /107(rep)-EGFP 和 Bacmid-Ac106/107-EGFP 分别转染 12 孔培养板中的 Sf9 细胞。提取 6、12、24 h p.t.细胞内病毒基因组。通过检测病毒基因组 DNA 拷贝数，可以反映出病毒 DNA 复制情况。如图 3.2 所示，Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP 和Bacmid-Ac106/107-EGFP、Bacmidac106/107KO -EGFP 处理组的基因组 DNA 拷贝数在6-24 h p.t.与 Bacmid-EGFP 处理组没有显著性差异，说明 ac106/107 不影响病毒基因组 DNA 的拷贝数，即不影响病毒 DNA 的复制。3.4.3 Ac106/107 影响病毒晚期基因 38k、vp39 以及 gp64 的转录用 2 µg 病毒杆粒 Bacmidac106/107KO -EGFP、Bacmid-EGFP、Bacmidac106/107KO -Ac106/107(rep)-EGFP 和 Bacmid-Ac106/107-EGFP 分别转染 12 孔培养板中的 Sf9 细胞,12、 24、48 h 后提取细胞总 RNA，测定浓度后反转录成 cDNA。通过 Real-time PCR 检 测 38k、vp39 以及 gp64 的转录水平。如图 3.3 A-C 所示，以 Bacmid-EGFP 在 12 h p.t.中各基因转录水平为对照，在 12-48 h p.t.野生型和回补型杆粒处理组中，三种晚期基因转录水平无显著性差异，敲除型杆粒处理组均显著性低于前两者，过表达型杆粒处理组均显著性高于其它三者。
验收细胞注意事项
1、收到昆虫卵巢细胞SF9细胞 ，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。
2、收到昆虫卵巢细胞SF9细胞 ，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止 3-5 小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。
3、收到昆虫卵巢细胞SF9细胞 后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时 血清浓度可以加到 15％去培养。若细胞迏到 80%左右 ，血清浓度还是在 10％。
4、收到昆虫卵巢细胞SF9细胞 时如无异常情况 ，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下 5-10ML 培养基继续培养：超过 80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000 转/分钟离心 3 分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
5、将培养瓶置于 37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以备不时之需。
6、24 小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加 3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS 或 Hanks’液洗涤后弃去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般 1-3 分钟，不超过 5 分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入 3-5ml 培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。
7、贴壁细胞 ，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2 培养。
特别提醒： 原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。
